人鞘氨醇激酶1/SPHK1检测/ELISA   Sphingosine Kinase 1 (SPHK1)Human 

1. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

2. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 

3. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 

4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 

5. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 

6. 温育：操作同3。 

7. 洗涤：操作同5。 

8. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 

9. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 

10. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。